Cloning of a cDNA for human agrin and generation of antisera against recombinant human agrin

Agriini on heparaanisulfaatti proteoglykaani, jota esiintyy laajalti ihmisen elimistön eri kudoksissa. Vaikka agriini tunnetaankin parhaiten hermo-lihasliitoksen syntymekanismista, sillä on myös keskeinen rooli hermolihasliitoksen surkastumasairauksissa sekä Alzheimerin taudissa. Huolimatta mahdoll...

Full description

Bibliographic Details
Main Author: Meltoranta, Jatta Julia
Other Authors: Matemaattis-luonnontieteellinen tiedekunta, Faculty of Sciences, Bio- ja ympäristötieteiden laitos, Department of Biological and Environmental Science, University of Jyväskylä, Jyväskylän yliopisto
Format: Master's thesis
Language:eng
Published: 2012
Subjects:
Online Access: https://jyx.jyu.fi/handle/123456789/38351
Description
Summary:Agriini on heparaanisulfaatti proteoglykaani, jota esiintyy laajalti ihmisen elimistön eri kudoksissa. Vaikka agriini tunnetaankin parhaiten hermo-lihasliitoksen syntymekanismista, sillä on myös keskeinen rooli hermolihasliitoksen surkastumasairauksissa sekä Alzheimerin taudissa. Huolimatta mahdollisista hyödyistä, joita agriinin laajemmalla kudostutkimuksella voitaisiin saavuttaa, ihmisen agriinin vasta-aineita ei ole kaupallisesti saatavilla. Jotta agriinin ilmentymistä voitaisiin paremmin tutkia, tämän työn tarkoituksena oli antiseerumien kehittäminen rekombinantti-agriinista. Tämä tehtiin agriini-proteiinia koodaavan jakson kloonauksella ihmisalkion cDNA-kirjastosta, tuottamalla rekombinanttiproteiinia bakteerisoluissa ja puhdistamalla kyseinen proteiini metalli-ioni-affiniteettikromatografialla. Tämän jälkeen vasta-aineita tuotettiin kaupallisesti immunisoimalla kaneja ja marsuja agriini-proteiinilla. Lopuksi vasta-aineet eristettiin eläinten seerumeista. Tuotetut vasta-aineet reagoivat Western-blottauksessa ja solujen värjäyksessä, mutta kudosten histologinen värjäystekniikkaa vaatii edelleen lisätutkimusta.