TCF7-transkriptiotekijän merkitys T-auttajasolujen erilaistumisessa

Kaikki verisolut kehittyvät luuytimen hematopoieettisista kantasoluista. Kypsyessään solut ohjelmoituvat tiettyyn kehityslinjaan ympäristöstään saamiensa signaalien ohjaamana. T-lymfosyytit kypsyvät kateenkorvassa saaden signaaleja kateenkorvan epiteelin soluilta. Usean kehitysvaiheen aikana soluist...

Full description

Bibliographic Details
Main Author: Linja, Marjo
Other Authors: Matemaattis-luonnontieteellinen tiedekunta, Faculty of Sciences, Bio- ja ympäristötieteiden laitos, Department of Biological and Environmental Science, University of Jyväskylä, Jyväskylän yliopisto
Format: Master's thesis
Language:fin
Published: 2009
Subjects:
Online Access: https://jyx.jyu.fi/handle/123456789/23615
_version_ 1828193145292062720
author Linja, Marjo
author2 Matemaattis-luonnontieteellinen tiedekunta Faculty of Sciences Bio- ja ympäristötieteiden laitos Department of Biological and Environmental Science University of Jyväskylä Jyväskylän yliopisto
author_facet Linja, Marjo Matemaattis-luonnontieteellinen tiedekunta Faculty of Sciences Bio- ja ympäristötieteiden laitos Department of Biological and Environmental Science University of Jyväskylä Jyväskylän yliopisto Linja, Marjo Matemaattis-luonnontieteellinen tiedekunta Faculty of Sciences Bio- ja ympäristötieteiden laitos Department of Biological and Environmental Science University of Jyväskylä Jyväskylän yliopisto
author_sort Linja, Marjo
datasource_str_mv jyx
description Kaikki verisolut kehittyvät luuytimen hematopoieettisista kantasoluista. Kypsyessään solut ohjelmoituvat tiettyyn kehityslinjaan ympäristöstään saamiensa signaalien ohjaamana. T-lymfosyytit kypsyvät kateenkorvassa saaden signaaleja kateenkorvan epiteelin soluilta. Usean kehitysvaiheen aikana soluista valitaan ne, jotka tunnistavat vieraat antigeenit, eivätkä sitoudu liian voimakkaasti omien solujen rakenteisiin. Kypsyttyään naiivit T-auttajasolut (Th) vapautetaan elimistöön, jossa ne antigeeninsä kohdattuaan aktivoituvat ja erilaistuvat Th1- tai Th2-soluiksi ympäristöstään saamiensa sytokiinisignaalien ohjaamaana. T-auttajasolujen tuottamat sytokiinit ohjaavat muita immuunipuolustuksen soluja. Th1 solut stimuloivat mm. makrofageja ja tappaja-T-soluja ja Th2-solut stimuloivat B-soluja. T-auttajasoluilla on merkittävä rooli myös immunivälitteisissä taudeissa, kuten autoimmuunitaudeissa, allergiassa ja astmassa. Kun erilaistuvia Th1- ja Th2-soluja on aiemmin tutkittu mikrosiruilla, on transkriptiotekijä TCF7:n havaittu ilmenevän vähemmän Th2-soluissa kaksi vuorokautta erilaistumiskasvatuksen alettua. Havainto pitää paikkaansa myös proteiinitasolla. TCF7:n tiedetään olevan tärkeä T-solujen kehitykselle kateenkorvassa ja on ajateltu, että se voisi säädellä myös solujen erilaistumista kateenkorvan ulkopuolella. TCF7 on osa Wnt-signaalinvälitysreittiä, joka on olennainen monien kudosten ja solujen kehitykselle. Aikuisella TCF7 ilmenee vain T-lymfosyyteissä. TCF7-proteiinista on monta eri isoformia, joiden merkityksestä ei ole juurikaan tietoa. Jokaisesta isoformista on sekä lyhyt että pitkä muoto. Pitkät muodot sitovat beta-kateniinia, joka yhdessä TCF7:n kanssa aktivoi Wnt-kohdegeenien transkription, kun taas lyhyiden muotojen on ajateltu estävän transkriptiota. Tutkiaksemme TCF7:n isoformien tehtäviä T-auttajasolujen erilaistumisessa halusimme liittää TCF7:n 2S- ja 2L-isoformit vektoriin yli-ilmenemiskasvatuksia varten. Lisäksi tahdoimme erotella 2D-immunoblottauksen avulla, mitkä isoformit ilmenevät Th1- ja Th2-soluissa. Tutkimistamme näytteistä ei saatu monistettua 2L-muotoa. 2S-muotoa kloonatessa monistettiin pätkä, joka sisälsi 2S-muodon alun ja lopun. Tästä syntyvä proteiini olisi pituudeltaan vain 110 aminohappoa, eikä sisältäisi edes kokonaan proteiiniperheelle tyypillistä DNA:ta sitovaa aluetta. Kloonattu muoto tuskin on toimiva TCF7-proteiinin isoformi ja puuttuvat eksonit ovat todennäköisesti poistettu jo mRNA:sta. 2D-immunoblottauksessa TCF7-vasta-aine ei antanut signaalia, joten emme pystyneet selvittämään, mitä isoformeja Th1- ja Th2-soluissa ilmennetään. TCF7:n merkitystä T-auttajasolujen erilaistumisessa selvitettiin hiljentämällä TCF7:n ilmeneminen siRNA:n avulla. Soluja kasvatettiin rinnakkain kontrollisolujen kanssa ja niille annettiin joko Th1- tai Th2-signaaleja. Viikon kasvatuksen aikana kerätyistä RNA-näytteistä mitattiin reaaliaikaisen kvantitatiivisen PCR:n avulla sekä TCF7:n ilmeneminen että merkkigeenejä, jotka ilmenevät enemmän joko Th1- tai Th2-soluissa. Lisäksi viimeisenä kasvatuspäivänä mitattiin virtausytometrillä paljonko solut tuottavat IFN-gammaa ja IL4:ää. Jokaisessa kasvatuksessa TCF7 oli selvästi hiljennetty kahden ensimmäisen vuorokauden aikana, mutta kasvatuksen lopussa hiljeneminen oli loppunut. Geenit, jotka kertovat T-auttajasolujen erilaistumisesta Th1-suuntaan, ilmenenivät TCF7-hiljennettyjen näytteiden Th1-soluissa vähemmän kasvatuksen kahden ensimmäisen vuorokauden aikana, mutta enemmän kasvatuksen lopussa. Th1-solut myös tuottivat hieman enemmän IFN-gammaa kuin kontrollinäytteiden Th1-solut. Th2-solujen geenien ilmenemiseen tai sytokiinituottoon ei TCF7:n hiljentämisellä näyttänyt olevan juurikaan merkitystä. Näyttäisi siltä, että kun TCF7 on hiljennetty, solujen erilaistuminen Th1-soluiksi hidastuu.
first_indexed 2023-03-22T09:58:37Z
format Pro gradu
free_online_boolean 1
fullrecord [{"key": "dc.contributor.author", "value": "Linja, Marjo", "language": null, "element": "contributor", "qualifier": "author", "schema": "dc"}, {"key": "dc.date.accessioned", "value": "2010-05-21T07:29:57Z", "language": null, "element": "date", "qualifier": "accessioned", "schema": "dc"}, {"key": "dc.date.available", "value": "2010-05-21T07:29:57Z", "language": null, "element": "date", "qualifier": "available", "schema": "dc"}, {"key": "dc.date.issued", "value": "2009", "language": null, "element": "date", "qualifier": "issued", "schema": "dc"}, {"key": "dc.identifier.other", "value": "oai:jykdok.linneanet.fi:1129679", "language": null, "element": "identifier", "qualifier": "other", "schema": "dc"}, {"key": "dc.identifier.uri", "value": "https://jyx.jyu.fi/handle/123456789/23615", "language": null, "element": "identifier", "qualifier": "uri", "schema": "dc"}, {"key": "dc.description.abstract", "value": "Kaikki verisolut kehittyv\u00e4t luuytimen hematopoieettisista kantasoluista. Kypsyess\u00e4\u00e4n solut ohjelmoituvat tiettyyn kehityslinjaan ymp\u00e4rist\u00f6st\u00e4\u00e4n saamiensa signaalien ohjaamana. T-lymfosyytit kypsyv\u00e4t kateenkorvassa saaden signaaleja kateenkorvan epiteelin soluilta. Usean kehitysvaiheen aikana soluista valitaan ne,\njotka tunnistavat vieraat antigeenit, eiv\u00e4tk\u00e4 sitoudu liian voimakkaasti omien solujen rakenteisiin. Kypsytty\u00e4\u00e4n naiivit T-auttajasolut (Th) vapautetaan elimist\u00f6\u00f6n, jossa ne antigeenins\u00e4 kohdattuaan aktivoituvat ja erilaistuvat Th1- tai Th2-soluiksi ymp\u00e4rist\u00f6st\u00e4\u00e4n saamiensa sytokiinisignaalien ohjaamaana. T-auttajasolujen tuottamat sytokiinit ohjaavat muita immuunipuolustuksen soluja. Th1 solut stimuloivat mm. makrofageja ja tappaja-T-soluja ja Th2-solut stimuloivat B-soluja. T-auttajasoluilla on merkitt\u00e4v\u00e4 rooli my\u00f6s immuniv\u00e4litteisiss\u00e4 taudeissa, kuten autoimmuunitaudeissa, allergiassa ja astmassa.\n\nKun erilaistuvia Th1- ja Th2-soluja on aiemmin tutkittu mikrosiruilla, on transkriptiotekij\u00e4 TCF7:n havaittu ilmenev\u00e4n v\u00e4hemm\u00e4n Th2-soluissa kaksi vuorokautta erilaistumiskasvatuksen alettua. Havainto pit\u00e4\u00e4 paikkaansa\nmy\u00f6s proteiinitasolla. TCF7:n tiedet\u00e4\u00e4n olevan t\u00e4rke\u00e4 T-solujen kehitykselle kateenkorvassa ja on ajateltu, ett\u00e4 se voisi s\u00e4\u00e4dell\u00e4 my\u00f6s solujen erilaistumista kateenkorvan ulkopuolella. TCF7 on osa Wnt-signaalinv\u00e4litysreitti\u00e4,\njoka on olennainen monien kudosten ja solujen kehitykselle. Aikuisella TCF7 ilmenee\nvain T-lymfosyyteiss\u00e4. TCF7-proteiinista on monta eri isoformia, joiden merkityksest\u00e4 ei ole juurikaan tietoa. Jokaisesta isoformista on sek\u00e4 lyhyt ett\u00e4 pitk\u00e4 muoto. Pitk\u00e4t muodot sitovat beta-kateniinia, joka yhdess\u00e4 TCF7:n kanssa aktivoi Wnt-kohdegeenien transkription, kun taas lyhyiden muotojen on ajateltu est\u00e4v\u00e4n transkriptiota. Tutkiaksemme TCF7:n isoformien teht\u00e4vi\u00e4 T-auttajasolujen erilaistumisessa halusimme liitt\u00e4\u00e4 TCF7:n 2S- ja 2L-isoformit vektoriin yli-ilmenemiskasvatuksia varten. Lis\u00e4ksi tahdoimme erotella 2D-immunoblottauksen\navulla, mitk\u00e4 isoformit ilmenev\u00e4t Th1- ja Th2-soluissa. Tutkimistamme n\u00e4ytteist\u00e4 ei\nsaatu monistettua 2L-muotoa. 2S-muotoa kloonatessa monistettiin p\u00e4tk\u00e4, joka sis\u00e4lsi 2S-muodon alun ja lopun. T\u00e4st\u00e4 syntyv\u00e4 proteiini olisi pituudeltaan vain 110 aminohappoa, eik\u00e4 sis\u00e4lt\u00e4isi edes kokonaan proteiiniperheelle tyypillist\u00e4 DNA:ta sitovaa aluetta. Kloonattu muoto tuskin on toimiva TCF7-proteiinin isoformi\nja puuttuvat eksonit ovat todenn\u00e4k\u00f6isesti poistettu jo mRNA:sta. 2D-immunoblottauksessa TCF7-vasta-aine ei antanut signaalia, joten emme pystyneet selvitt\u00e4m\u00e4\u00e4n, mit\u00e4 isoformeja Th1- ja Th2-soluissa ilmennet\u00e4\u00e4n.\n\nTCF7:n merkityst\u00e4 T-auttajasolujen erilaistumisessa selvitettiin hiljent\u00e4m\u00e4ll\u00e4 TCF7:n ilmeneminen siRNA:n avulla. Soluja kasvatettiin rinnakkain kontrollisolujen kanssa ja niille annettiin joko Th1- tai Th2-signaaleja. Viikon kasvatuksen aikana ker\u00e4tyist\u00e4 RNA-n\u00e4ytteist\u00e4 mitattiin reaaliaikaisen kvantitatiivisen PCR:n avulla\nsek\u00e4 TCF7:n ilmeneminen ett\u00e4 merkkigeenej\u00e4, jotka ilmenev\u00e4t enemm\u00e4n joko Th1- tai Th2-soluissa. Lis\u00e4ksi viimeisen\u00e4 kasvatusp\u00e4iv\u00e4n\u00e4 mitattiin virtausytometrill\u00e4 paljonko solut tuottavat IFN-gammaa ja IL4:\u00e4\u00e4. Jokaisessa kasvatuksessa TCF7 oli selv\u00e4sti hiljennetty kahden ensimm\u00e4isen vuorokauden aikana, mutta kasvatuksen\nlopussa hiljeneminen oli loppunut. Geenit, jotka kertovat T-auttajasolujen erilaistumisesta Th1-suuntaan, ilmeneniv\u00e4t TCF7-hiljennettyjen n\u00e4ytteiden Th1-soluissa v\u00e4hemm\u00e4n kasvatuksen kahden ensimm\u00e4isen vuorokauden aikana, mutta enemm\u00e4n kasvatuksen lopussa. Th1-solut my\u00f6s tuottivat hieman enemm\u00e4n IFN-gammaa\nkuin kontrollin\u00e4ytteiden Th1-solut. Th2-solujen geenien ilmenemiseen tai sytokiinituottoon ei TCF7:n hiljent\u00e4misell\u00e4 n\u00e4ytt\u00e4nyt olevan juurikaan merkityst\u00e4. N\u00e4ytt\u00e4isi silt\u00e4, ett\u00e4 kun TCF7 on hiljennetty, solujen erilaistuminen Th1-soluiksi hidastuu.", "language": "", "element": "description", "qualifier": "abstract", "schema": "dc"}, {"key": "dc.description.provenance", "value": "Submitted using Plone Publishing form by Marjo Linja (maanlinj) on 2010-05-21 07:29:54.082211. Form: Pro gradu -lomake (1 tekij\u00e4) (https://kirjasto.jyu.fi/julkaisut/julkaisulomakkeet/pro-gradu-lomake-1-tekijae). JyX data:", "language": "en", "element": "description", "qualifier": "provenance", "schema": "dc"}, {"key": "dc.description.provenance", "value": "Submitted by jyx lomake-julkaisija (jyx-julkaisija@noreply.fi) on 2010-05-21T07:29:57Z\nNo. of bitstreams: 2\nURN:NBN:fi:jyu-201005211893.pdf: 559476 bytes, checksum: 87337d32f7178d804e105c8d6d87d8db (MD5)\nlicense.html: 4999 bytes, checksum: 5b6663e2d1bde9cdecee6f987fc0a1ef (MD5)", "language": "en", "element": "description", "qualifier": "provenance", "schema": "dc"}, {"key": "dc.description.provenance", "value": "Made available in DSpace on 2010-05-21T07:29:57Z (GMT). No. of bitstreams: 2\nURN:NBN:fi:jyu-201005211893.pdf: 559476 bytes, checksum: 87337d32f7178d804e105c8d6d87d8db (MD5)\nlicense.html: 4999 bytes, checksum: 5b6663e2d1bde9cdecee6f987fc0a1ef (MD5)\n Previous issue date: 2009", "language": "en", "element": "description", "qualifier": "provenance", "schema": "dc"}, {"key": "dc.format.extent", "value": "59 sivua", "language": null, "element": "format", "qualifier": "extent", "schema": "dc"}, {"key": "dc.language.iso", "value": "fin", "language": null, "element": "language", "qualifier": "iso", "schema": "dc"}, {"key": "dc.rights", "value": "In Copyright", "language": "en", "element": "rights", "qualifier": null, "schema": "dc"}, {"key": "dc.subject.other", "value": "T-solujen kypsyminen", "language": null, "element": "subject", "qualifier": "other", "schema": "dc"}, {"key": "dc.subject.other", "value": "T-auttajasolujen erilaistuminen", "language": null, "element": "subject", "qualifier": "other", "schema": "dc"}, {"key": "dc.subject.other", "value": "transkriptiotekij\u00e4 TCF7", "language": null, "element": "subject", "qualifier": "other", "schema": "dc"}, {"key": "dc.title", "value": "TCF7-transkriptiotekij\u00e4n merkitys T-auttajasolujen erilaistumisessa", "language": null, "element": "title", "qualifier": null, "schema": "dc"}, {"key": "dc.type", "value": "master thesis", "language": null, "element": "type", "qualifier": null, "schema": "dc"}, {"key": "dc.identifier.urn", "value": "URN:NBN:fi:jyu-201005211893", "language": null, "element": "identifier", "qualifier": "urn", "schema": "dc"}, {"key": "dc.type.dcmitype", "value": "Text", "language": "en", "element": "type", "qualifier": "dcmitype", "schema": "dc"}, {"key": "dc.type.ontasot", "value": "Pro gradu", "language": "fi", "element": "type", "qualifier": "ontasot", "schema": "dc"}, {"key": "dc.type.ontasot", "value": "Master\u2019s thesis", "language": "en", "element": "type", "qualifier": "ontasot", "schema": "dc"}, {"key": "dc.contributor.faculty", "value": "Matemaattis-luonnontieteellinen tiedekunta", "language": "fi", "element": "contributor", "qualifier": "faculty", "schema": "dc"}, {"key": "dc.contributor.faculty", "value": "Faculty of Sciences", "language": "en", "element": "contributor", "qualifier": "faculty", "schema": "dc"}, {"key": "dc.contributor.department", "value": "Bio- ja ymp\u00e4rist\u00f6tieteiden laitos", "language": "fi", "element": "contributor", "qualifier": "department", "schema": "dc"}, {"key": "dc.contributor.department", "value": "Department of Biological and Environmental Science", "language": "en", "element": "contributor", "qualifier": "department", "schema": "dc"}, {"key": "dc.contributor.organization", "value": "University of Jyv\u00e4skyl\u00e4", "language": "en", "element": "contributor", "qualifier": "organization", "schema": "dc"}, {"key": "dc.contributor.organization", "value": "Jyv\u00e4skyl\u00e4n yliopisto", "language": "fi", "element": "contributor", "qualifier": "organization", "schema": "dc"}, {"key": "dc.subject.discipline", "value": "Solu- ja molekyylibiologia", "language": "fi", "element": "subject", "qualifier": "discipline", "schema": "dc"}, {"key": "dc.subject.discipline", "value": "Cell and molecular biology", "language": "en", "element": "subject", "qualifier": "discipline", "schema": "dc"}, {"key": "dc.type.coar", "value": "http://purl.org/coar/resource_type/c_bdcc", "language": null, "element": "type", "qualifier": "coar", "schema": "dc"}, {"key": "dc.rights.accesslevel", "value": "openAccess", "language": "fi", "element": "rights", "qualifier": "accesslevel", "schema": "dc"}, {"key": "dc.type.publication", "value": "masterThesis", "language": null, "element": "type", "qualifier": "publication", "schema": "dc"}, {"key": "dc.subject.oppiainekoodi", "value": "4013", "language": null, "element": "subject", "qualifier": "oppiainekoodi", "schema": "dc"}, {"key": "dc.subject.yso", "value": "solut", "language": null, "element": "subject", "qualifier": "yso", "schema": "dc"}, {"key": "dc.rights.url", "value": "https://rightsstatements.org/page/InC/1.0/", "language": null, "element": "rights", "qualifier": "url", "schema": "dc"}]
id jyx.123456789_23615
language fin
last_indexed 2025-03-31T20:01:44Z
main_date 2009-01-01T00:00:00Z
main_date_str 2009
online_boolean 1
online_urls_str_mv {"url":"https:\/\/jyx.jyu.fi\/bitstreams\/fc3e606a-acf7-4fa7-b648-17b3f2e16053\/download","text":"URN:NBN:fi:jyu-201005211893.pdf","source":"jyx","mediaType":"application\/pdf"}
publishDate 2009
record_format qdc
source_str_mv jyx
spellingShingle Linja, Marjo TCF7-transkriptiotekijän merkitys T-auttajasolujen erilaistumisessa T-solujen kypsyminen T-auttajasolujen erilaistuminen transkriptiotekijä TCF7 Solu- ja molekyylibiologia Cell and molecular biology 4013 solut
title TCF7-transkriptiotekijän merkitys T-auttajasolujen erilaistumisessa
title_full TCF7-transkriptiotekijän merkitys T-auttajasolujen erilaistumisessa
title_fullStr TCF7-transkriptiotekijän merkitys T-auttajasolujen erilaistumisessa TCF7-transkriptiotekijän merkitys T-auttajasolujen erilaistumisessa
title_full_unstemmed TCF7-transkriptiotekijän merkitys T-auttajasolujen erilaistumisessa TCF7-transkriptiotekijän merkitys T-auttajasolujen erilaistumisessa
title_short TCF7-transkriptiotekijän merkitys T-auttajasolujen erilaistumisessa
title_sort tcf7 transkriptiotekijän merkitys t auttajasolujen erilaistumisessa
title_txtP TCF7-transkriptiotekijän merkitys T-auttajasolujen erilaistumisessa
topic T-solujen kypsyminen T-auttajasolujen erilaistuminen transkriptiotekijä TCF7 Solu- ja molekyylibiologia Cell and molecular biology 4013 solut
topic_facet 4013 Cell and molecular biology Solu- ja molekyylibiologia T-auttajasolujen erilaistuminen T-solujen kypsyminen solut transkriptiotekijä TCF7
url https://jyx.jyu.fi/handle/123456789/23615 http://www.urn.fi/URN:NBN:fi:jyu-201005211893
work_keys_str_mv AT linjamarjo tcf7transkriptiotekijänmerkitystauttajasolujenerilaistumisessa