The regulation of mitochondrial network in rhabdomyosarcoma by prospero-related homeobox 1 - Gynther, Veera (2024)
Rabdomyosarkooma (RMS) on lasten yleisin pehmytkudossyöpä ja muistuttaa histologialtaan erilaistuvaa luustolihasta. RMS-potilaiden ennuste on huono, ja nykyiset hoitomenetelmät aiheuttavat vakavia sivuvaikutuksia. Prospero-related homeobox 1 (PROX1) -transkriptiofaktorin on huomattu olevan yhteydessä RMS-solujen kasvuun, myogeenisiin ominaisuuksiin ja mitokondriogeenien säätelyyn. PROX1-hiljennyksen on huomattu vähentävän RMS-kasvainten kasvua. Tämän tutkimuksen tavoitteena oli selvittää, sääteleekö PROX1 RMS-solujen mitkondrioverkostoa ja mitokondriaalista fissiota ja fuusiota. Kokeet tehtiin kahdella RMS-solulinjalla, RD ja KLHEL1, käyttäen kontrollisoluina terveitä primäärisiä myoblasteja. PROX1-hiljennys ja kontrollikäsittely tehtiin hyödyntäen lentivirusvektoria. Mitokondriot visualisoitiin MitoTracker-värjäyksellä ja plasmiditransfektiolla, ja kuvantaminen suoritettiin fiksatuille ja eläville soluille konfokaalimikroskoopilla. Käsitellyt solut segmentoitiin MitoTrackerillä värjättyjen fiksattujen solujen kuvista Cellpose-algoritmin avulla ja niiden mitokondriot analysoitiin ImageJ-kuvankäsittelyohjelmalla. T-testi tai ei-parametrinen Mann-Whitney U -testi suoritettiin GraphPad Prism -tilasto-ohjelmalla mitokondriaalisille muuttujille vertaamalla PROX1-hiljennettyjä ja kontrollisoluja toisiinsa. PROX1-hiljennyksen huomattiin vaikuttavan kaikkiin solutyyppeihin, mutta RD- ja KLHEL1-syöpäsoluihin hiljennys vaikutti enemmän kuin terveisiin primäärisiin myoblasteihin. RD- ja KLHEL1-solujen mitokondriot olivat pienempiä ja pyöreämpiä PROX1-hiljennyksen myötä, mikä viittaa mitokondriaalisen dynamiikan muutoksesta lisääntyneen fission ja vähentyneen fuusion suuntaan. PROX1-hiljennys vähensi mitokondrioita KLHEL1-soluissa, mutta ei vaikuttanut RD-solujen mitokondrioiden määrään. Terveiden primääristen myoblastien mitokondrioita oli vähemmän, mutta niiden koko tai muoto ei muuttunut PROX1-hiljennyksen myötä. Näitä tuloksia voidaan toivottavasti hyödyntää uusien hoitomenetelmien kehittelyssä, mahdollisesti mitokondriaalista fissiota tehostamalla tai fuusiota inhiboimalla lääkkeiden avulla.