Fytokromi-spesifisen domeenin lisäkkeen vaikutus bakteerifytokromin valoaktivointiin : tuotto, puhdistus ja UV-Vis-spektroskopinen analyysi - Saari, Maiju; Rauhanen, Katariina (2021)
Fytokromit ovat punaista ja kaukopunaista valoa absorboivia valoreseptoreita, joita esiintyy kasveissa, bakteereissa ja sienissä. Fytokromiin sitoutunut molekyyli, kromofori, absorboi fotonin ja saa aikaan muutoksia fytokromin kolmiulotteisessa rakenteessa: punaista valoa absorboiva Pr-tila virittyy Pfr-tilaksi, joka palaa takaisin Pr-tilaan absorboimalla kaukopunaista valoa tai ilman valotusta pimeäpalautumalla. Fytokromin valovaihtuvuudessa tärkeän rakenteen on havaittu olevan fytokromi-spesifisessä domeenissa (PHY-domeenissa) sijaitseva PHY-lisäke. Tässä tutkielmassa pyrkimyksenä oli tuottaa ja puhdistaa Deinococcus radiodurans -bakteerifytokromia ilman PHY-lisäkettä ja verrata mutantin UV-Vis-spektriä villityypin spektriin. Lisäksi selvitettiin, saadaanko mutantti valotettua Pfr-tilaan. Mutanttia saatiin tuotettua ja puhdistettua pieni määrä, 0,51 mg. Mutantin valotus Pfr-tilaan onnistui. Mutantin ja villityypin UV-Vis-spektrit erosivat toisistaan, sillä mutantti absorboi villityyppiä vähemmän punaista ja kaukopunaista valoa. Pimeäpalautumisessa, jossa tarkasteltiin mutantin palautumista Pfr-tilasta takaisin Pr-tilaan ilman valotusta, havaittiin mutantin palautuvan huomattavasti nopeammin kuin villityypin. Tutkielman keskeinen päätelmä on, että PHY-lisäke voidaan poistaa fytokromista säilyttäen sen valovaihtuvuus. Mutantin UV-Vis-spektrin ja pimeäpalautumisen perusteella voidaan päätellä, että PHY-lisäke stabiloi Pfr-tilaa.