Kumipuun Hevb2-proteiinin puhdistus, tunnistus ja karakterisointi sekä merkitys luonnonkumiallergeenina - Karinen, Anu (2020)
Välitön tyypin I luonnonkumiallergia on IgE-välitteinen allerginen reaktio, jota esiintyy säännöllisesti luonnonkumituotteiden kanssa kosketuksiin joutuvilla henkilöillä. Luonnonkumiallergia aiheutti varsinkin 1990-luvulla vakavia ongelmia erityisesti terveydenhuollon työntekijöille ja potilaille, jotka ovat syntymästään lähtien läpikäyneet lukuisia kirurgisia toimenpiteitä, kuten selkärankahalkiolapset. Vaikka huomattavaa edistymistä on tapahtunut luonnonkumiallergian tunnistamisessa ja ehkäisyssä, voi se yhä olla kehittyvissä, mutta myös teollistuneissa maissa merkittävä työperäinen sairaus tai aiheuttaa allergisia reaktioita riskiryhmiin kuuluvilla, jotka käyttävät luonnonkumisia lääkinnällisiä tai kotitaloustuotteita. Tähän mennessä 15 luonnonkumin proteiinia on saanut allergeeniluokituksen. Näistä yksi, Hevb2 (-1,3-glukanaasi), on tunnistettu ja kloonattu, mutta sen merkitys allergeenina on jäänyt epäselväksi. Tässä tutkimuksessa Hevb2-proteiini puhdistettiin ultrasentrifugoidun luonnonkumin pohjafraktiosta (B-seerumi) kationinvaihto-, geelisuodatus- ja käänteisfaasikromatografialla. Proteiinin tunnistamisessa ja sen rakenteen karakterisoimisessa käytettiin geelielektroforeesia, MALDI-TOF MS (matriisiavusteinen laserdesorptio-ionisaatio-lentoaika massaspektrometria), ESI (sähkösumutusionisaatio) MS ja MS/MS -menetelmiä sekä N-terminaalista sekvensointia. Immunologinen karakterisointi suoritettiin ELISA (entsyymivälitteinen immunosorbenttimääritys) ja Western blot -menetelmillä käyttämällä suomalaisten potilaiden seerumeja, joista muutama oli peräisin myös luonnonkumiallergisilta potilailta. Hevb2-proteiinin havaittiin esiintyvän kahtena, molekyylipainoltaan 36,4 ja 37,6 kDa kokoisena isomuotona. Isomuodot tunnistettiin ja niiden yhteys määritettiin massaspektrometrisesti peptidisormenjälkien avulla. Molemmat olivat N-terminaalisesti blokattuja, jonka aiheutti 36,4 kDa isomuodolla syklinen pyroglutamiinihappo. ELISA-immunomäärityksessä vain 10 %:lla (7/71) potilaista löytyi spesifistä IgE-vasta-ainetta 36,4 kDa Hevb2-proteiinille. Vaikka tämän alustavan kokeen perusteella Hevb2-proteiini ei vaikuttaisi olevan merkittävä luonnonkumiallergeeni suomalaisilla potilailla, tutkimus on syytä toistaa valikoituneemmalla potilas- ja kontrollijoukolla niin, että molemmat isomuodot analysoidaan yhdessä ja proteiininäytteen puhtaus varmistetaan vielä esimerkiksi saatavilla olevilla monoklonaalisilla vasta-aineilla.