Sperm flagellar protein 2 expression in mouse tissues and transfection in mIMCD3 cells - Sahinaho, Ulla-Maria (2020)
Miesten hedelmättömyys on kasvava ongelma länsimaissa. Värekarvasairaudet voivat aiheuttaa miesten hedelmättömyyttä. Siittiöiden kehityksen tutkimus voi valaista syitä siittiöiden rakenteellisten ja toiminnallisten vikojen taustalla. Sperm flagellar protein 2 (Spef2) -geeni ilmentyy kudoksissa, joissa on liikkuvia värekarvoja, ja se on välttämätön siittiön hännän kehitykselle ja liikkuvuudelle. Spef2-knockout hiirimallin avulla tutkittiin Spef2:n toimintaa värekarvoissa ja siittiöissä. Liikkuvien värekarvojen toimintahäiriöt aiheuttavat hiirimallilla kroonisia hengitystieinfektioita, siittiövioista johtuvaa hedelmättömyyttä ja vesipäätä. Tämän tutkimuksen tavoite oli kehittää vasta-aine, joka sitoutuu SPEF2:n adenylaattikinaasidomeeniin (KAD). Antigeeni vasta-ainetta varten tuotettiin E.colissa ja puhdistettiin affiniteettikromatografialla. Western blot-menetelmällä ekspressio havaittiin kiveksessä, lisäkiveksessä, keuhkoissa, munanjohtimessa ja mahdollinen uusi isoformi aivoissa. Kaksi SPEF2-isoformia puuttui poistogeenisten hiirten kiveksistä. Kudosvärjäyksissä SPEF2 lokalisoitui spermatosyytteihin, spermatideihin, spermatidien mansettiin, siittiön häntään, Sertolin soluihin ja henkitorven epiteelisolujen värekarvoihin. Toinen tavoite oli kehittää fluoresoiva solulinja, jolla tutkitaan SPEF2:n kuljetusta värekarvaan. Kolme SPEF2-GFP fuusioproteiinia ilmennettiin eri mIMCD3-solulinjoissa. 5´TE-GFP, KAD-GFP ja 3´TE-GFP vastasivat kivesspesifisen Spef2-sekvenssin eri toiminnallisia alueita. Fuusioproteiinien paikantuminen värekarvaan tai siihen liittyviin rakenteisiin, kuten basal bodyyn, viittaa että Spef2:lla olisi useita värekarvalokalisaatiosignaaleja.