Endosomal ions and serum promote enterovirus uncoating - Haapakoski, Marjo (2020)
Enterovirusten B ryhmään kuuluva Echovirus 1 on RNA-virus, jonka tiedetään infektoivan soluja ei-happamien endosomien välityksellä ja kerääntyvän neutraaleihin multivesikulaarisiin kappaleisiin. Tämän tutkimuksen alussa oli olemassa hyvin rajallisesti tietoa fysiologisista tekijöistä, jotka johtavat enterovirusten avautumiseen. Tutkimuksen tarkoituksena oli selvittää in vitro millainen yhdistelmä ioneja edistää echovirus 1:n avautumista fysiologisessa lämpötilassa. Päämääränä oli myös tutkia seerumin vaikutusta viruksen avautumiseen. Spektroskooppisissa mittauksissa käytettiin hyväksi SYBR Green II:n kykyä sitoutua viruksen RNA:han ja saada aikaan voimakasta fluoresenssia siinä tilanteessa, kun virus on avautunut vähän tai RNA on kokonaan vapautunut viruksen ulkopuolelle. Viruksen infektiivisyyttä erilaisten käsittelyjen jälkeen arvioitiin muun muassa sytopaattisen määrityksen avulla. Radioaktiivisesti leimatun viruksen avautumisen taso varmistettiin lopulta sakkaroosi- ja cesiumkloridigradienttierottelulla. Matala natriumpitoisuus yhdistettynä korkeaan kaliumpitoisuuteen edisti viruksen avautumista tämän tutkimuksen tulosten mukaan. Seerumilla havaittiin olevan myös viruspartikkelin avautumista ja genomin vapautumista edistävä vaikutus. Lisäksi tutkimuksessa tuli ilmi, että MgCl2 ja CaCl2 vakauttavat viruksen rakennetta. Tämä tutkimus paljasti uutta tietoa fysiologisista tekijöistä, jotka edistävät enterovirusten avautumista. Tutkimuksen tulosten pohjalta on mahdollista suunnitella uusia aihetta syventäviä jatkotutkimuksia.