Proteiini IX:n yliekspression vaikutus adenovirusvektoreiden tuottoon - Kekkonen, Nanne (2020)
Geeniterapiassa sairautta hoidetaan geenin siirrolla, usein viemällä siirtogeeni soluun kuljettimen eli vektorin avulla. Yleisimpiä käytettyjä vektoreita ovat virukset johtuen niiden luontaisesta kyvystä siirtää perimänsä solujen monistettavaksi. Virusvektoreiden valmistuksessa lopputuotteen ominaisuuksiin voidaan vaikuttaa genomin muokkaamisella, mutta myös esimerkiksi muokkaamalla tuottosolun toimintaa tai tuottamalla tuottosoluissa viruksen ulkopuolisia proteiineja. Adenoviruksen proteiini IX (pIX) sijaitsee viruksen kapsidissa ja sen ensisijaisena tehtävänä on stabiloida kapsidin rakennetta. On kuitenkin osoitettu, että tällä proteiinilla on muitakin rooleja adenovirusinfektiossa. Tässä tutkimuksessa oli tarkoitus selvittää nostaako pIX:n yliekspressio villityypin adenoviruksen ja kolmen eri genomin omaavan adenovirusvektorin tuottavuutta tuottosoluissa. Vektoreita tuotettiin sekä adherentti- että suspensiosoluissa, pIX:n yliekspression kanssa tai ilman. Vektorit puhdistettiin ultrasentrifugoinnilla sekä dialyysilla ja niiden tiitterit määritettiin ddPCR:n avulla. Lisäksi tutkielmassa pyrittiin havaitsemaan pIX:n sijoittumista tuottosoluissa leimaamalla pIX:llä transfektoituja soluja. pIX:n yliekspression ei havaittu nostavan virusvektoreiden tuottavuutta adherenttisoluissa, kun taas suspensiosolujen kohdalla tuottavuus nousi osalla. Suspensiossa onnistuttiin myös tuottamaan ei-pIX:ä sisältävää adenovirusvektoria samalla tehokkuudella kuin pIX:ä sisältävää virusvektoria. Tämä oli iso saavutus, sillä suspensiotuottoihin siirtyminen mahdollistaisi tulevaisuudessa kyseisen vektorin tuoton skaalauksen kaupallisiin suuren mittakaavan tuottoihin. Virusvektoreiden valmistusprosessien optimoinnilla voidaan merkittävästi vähentää tuotannon kustannuksia ja näin ollen eri virusvektorien tuottavuuden biologian tutkiminen on tärkeää nyt ja tulevaisuudessa.