Novel small molecule in differentiation of hiPSC derived cardiomyocytes and single cell beating analysis - Takanen, Anna (2017)
Sydäntaudit ovat johtava kuolinsyy maailmanlaajuisesti, ja siksi potilasspesifisien lääketestausmallien sekä kudosregeneraation tutkimus on ajankohtainen aihe. Nykyinen teknologia ei pysty vielä tuottamaan suuria määriä puhtaita ihmisen indusoiduista pluripotenteista kantasoluista (hiPSC) erilaistettuja sydänsoluja tarpeeksi tehokkaasti, jotta niitä voitaisiin käyttää regeneratiivisessa lääketieteessä ja luotettavammassa lääketestauksessa. Sydänsolujen tuottamista ja karakterisointia täytyy kehittää. Tämän tutkimuksen tavoite oli jatkaa potilasspesifisten hiPSC sydänsolujen erilaistamisen karakterisoimista ja testata oletetun sydänsolujen erilaistusta tehostavan pienmolekyylin (PCDE) vaikutusta erilaistamisen tehokkuuteen. Hypoteesi oli, että kyseinen pienmolekyyli parantaisi erilaistustehokkuutta. Erilaistustehokkuutta mitattiin virtaussytometrisesti sydänmarkkerilla, Troponiin T:llä, ja kardiomyosiitit karakterisoitiin immunovärjäyksillä sekä kvantitatiivisen polymeraasiketjureaktion (qPCR) avulla. Geeniekspressiota analysoitiin RNA-näytteistä erilaistuksen eri vaiheista. Tutkimuksen aikana arvioitiin tekniikkana videopohjaista yksittäisten solujen sykeanalyysia, joka on tietokoneohjelmaan pohjautuva tukeva tutkimusmenetelmä yksittäisten solujen sykekuvion määrittämiseksi. Tuloksiin perustuen PCDE ei onnistunut tehostamaan hiPSC sydänsolujen erilaistamista ja saattoi vähentää sydänmarkkereiden ekspressiota. Totesimme kuitenkin, että videopohjaista sykeanalyysiä voitaisiin käyttää yhdessä yksittäisten solujen PCR-tutkimusten kanssa sydänsolujen paremman karakterisoinnin saavuttamiseksi.