Effect of substrate rigidity on distribution of nuclear actin and lamin A - Ijäs, Tommi (2016)
Tämä tutkimus keskittyi analysoimaan, onko solun ulkopuolisen ympäristön jäykkyydellä vaikutusta tuman sisäisten proteiinien jakautumiseen. Tuman mekanosensitiivisyyden vaikutusta lamiini A:n ja aktiinin sijaintiin tumassa tutkittiin soluilla, joita kasvatettiin eri jäykkyisillä kasvualustoilla. Kokeissa laskettiin lamiini A:n suhteellinen määrä vertaamalla tumalevyyn sitoutunutta ja tumassa vapaana olevaa lamiini A:ta, sekä suhteellinen määrä aktiinille vertaamalla tumansisäisen aktiinin määrää solulimassa olevaan. Kahta eri jäykkyistä (1,5 kPa ja 33 kPa Youngin moduluksella) polyakryyliamidi (PAA)-geeliä käytettiin säädettävänä kasvualustana soluille. Näillä geeleillä kasvatettiin hiiren 3T3 fibroblastisoluja, joihin oli transfektoitu konstrukti, joka ilmentää joko lamiini A:ta tai aktiinia tehostetulla vihreällä fluoresoivalla proteiinilla (EGFP) leimattuna. Proteiineja ilmentäviä soluja kuvannettiin laser-skannaus konfokaalimikroskoopilla. Data käsiteltiin ja analysoitiin imageJ-ohjelmalla ja lopulliset tulokset saatiin vertaamalla tuman sisäistä vapaata lamiini A:ta tumalevyyn sistoutuneeseen, sekä aktiinille vertaamalla tuman sisäisen aktiinin intensiteettiä solulimasta saatuun intensiteettiin. Lamiini A:lle tulokset näyttivät, että suurempi jäykkyys vaikuttaa lamiini A:n dynamiikkaan suurentamalla tumalimassa vapaana olevan lamiini A:n määrää suhteessa tumalevyyn sitoutuneeseen. Aktiinille tulokset olivat vähemmän yhteneviä tutkimuksen aikana, mutta myös tumansisäisen aktiinin määrä vaikuttaisi kasvavan jäykemmällä alustalla suhteutettuna soluliman aktiinipitoisuuteen. Lamiini A:n suhteen on kuitenkin näytetty että sen kokonaispitoisuus kasvaa ja fosforyloidun lamiini A:n määrä vähenee kun solu on jäykemmässä ympäristössä. Vaikka nämä tulokset eivät suoranaisesti tuekkaan toisiaan, osoitettiin tutkimuksessa alustan jäykkyyden vaikuttavan sitoutuneen ja vapaan lamiini A:n suhteeseen. Aktiinista saadut tulokset tukevat tietoja aktiinin aktiivisen tumakuljetuksen kasvamisesta kun solu joutuu rasituksen alaiseksi. Molemmat tulokset kuitenkin osoittavat jäykkyydellä olevan suora vaikutus tuman proteiinien dynamiikkaan.