Filamiinin ja pernan tyrosiinikinaasin sitoutuminen sekä vuorovaikutuksen merkitys verihiutaleiden signaloinnissa - Sinisaari-Kaislo, Susanna (2013)
Hyytymän muodostuminen tapahtuu verisuoneen kohdistuneen vaurion seurauksena verenvuodon tyrehdyttämiseksi. Hyytymä voi muodostua myös verisuonen pinnalle silloinkin kun verenvuotoa ei esiinny. Irrotessaan verenvuodon mukaan hyytymä voi olla hengenvaarallinen. Erilaiset hyytymän muodostamat veritulpat ovat merkittävä kuolinsyy vuosittain. Verihiutaleet ovat keskeinen tekijä tässä tapahtumassa. Niiden aktivaatio tapahtuu kalvoreseptoreiden ja solun sisäisen signaloinnin monimutkaisesta vuorovaikutuksesta. Tämän tutkimuksen kohteina ovat pernan tyrosiinikinaasi ja filamiini A, joiden välinen vuorovaikutus on tärkeää verihiutaleiden toiminnalle. Verihiutaleet, joissa tämä vuorovaikutus on häiriintynyt, ovat morfologisesti epänormaaleja eivätkä toimi normaalilla tavalla hyytymän muodostumisessa. Pernan tyrosiinikinaasi, Syk (engl. spleen tyrosine kinase) on ei-reseptorityyppinen solun signalointiin liittyvä proteiinikinaasi. Se esiintyy solussa sekä solulimassa että tumassa. Syk on osallisena monissa solun fysiologisissa tapahtumissa, esimerkiksi morfogeneesissä, solun kasvussa, migraatiossa ja solun tukirangan uudelleen järjestäytymisessä. Filamiini on kookas solutukirangan proteiini. Filamiinin tiedetään vuorovaikuttavan useiden muiden proteiinien kanssa monissa eri rooleissa. Se liittää solussa aktiinisäikeitä verkostoksi, se ankkuroi kalvoproteiineja solun tukirankaan ja toimii solussa sekä signaalivälitysproteiinien telineenä että mekaanisena tukena. Tässä työssä tutkittiin filamiini A:n ja Syk:n sitoutumista ja sen affiniteettia. Erityisenä kysymyksenä oli selvittää, vaikuttaako filamiinin neljännen immunoglobuliinin kaltaisen domeenin läheinen vuorovaikutus viidennen domeenin kanssa Syk:n sitoutumiseen viidenteen domeeniin. Alustavissa kokeissa havaittiin Syk:n sitoutuminen viidenteen domeeniin eikä neljännellä domeenilla havaittu olevan vaikutusta sitoutumiseen. Hankaluudet Syk:n tuottamisessa E.coli-bakteerisoluissa rajoittivat tutkimusta. Kun Syk:n tuotto-ongelmat saadaan ratkaistua, voidaan suorittaa jatkotutkimuksia sitoutumisen mekanismista.